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1.
Genet. mol. biol ; 31(3): 743-750, 2008. ilus, tab
Article in English | LILACS | ID: lil-490064

ABSTRACT

In prokaryotes molybdenum is taken up by a high-affinity ABC-type transporter system encoded by the modABC genes. The endophyte â-Proteobacterium Herbaspirillum seropedicae has two modABC gene clusters and two genes encoding putative Mo-dependent regulator proteins (ModE1 and ModE2). Analysis of the amino acid sequence of the ModE1 protein of H. seropedicae revealed the presence of an N-terminal domain containing a DNA-binding helix-turn-helix motif (HTH) and a C-terminal domain with a molybdate-binding motif. The second putative regulator protein, ModE2, contains only the helix-turn-helix motif, similar to that observed in some sequenced genomes. We cloned the modE1 (810 bp) and modE2 (372 bp) genes and expressed them in Escherichia coli as His-tagged fusion proteins, which we subsequently purified. The over-expressed recombinant His-ModE1 was insoluble and was purified after solubilization with urea and then on-column refolded during affinity chromatography. The His-ModE2 was expressed as a soluble protein and purified by affinity chromatography. These purified proteins were analyzed by DNA band-shift assays using the modA2 promoter region as probe. Our results indicate that His-ModE1 and His-ModE2 are able to bind to the modA2 promoter region, suggesting that both proteins may play a role in the regulation of molybdenum uptake and metabolism in H. seropedicae.

2.
Rev. bras. anal. clin ; 33(4): 171-174, 2001. tab, graf
Article in Portuguese | LILACS | ID: lil-322750

ABSTRACT

A performance de 36 laboratórios da regiäo Sul do Brasil, que voluntariamente participaram neste estudo, foi avaliada através da quantificaçäo da glicose. As amostras analisadas continham glicose, dissolvida em ácido benzóico saturado e 25 porcento de glicerol, nas concentraçöes de 20, 200 e 1000 mg/dL. O erro total máximo permitido nas determinaçöes foi estabelecido como 10 porcento do valor esperado ou ñ 6 mg/dL, o que for maior, como recomendado pelo critério do CLIA. As metodologias empregadas neste estudo foram glicose oxidase (80 porcento), hexoquinase (17 porcento) e glicose desidrogenase (3 porcento). Para a amostra de 200 mg/dL, 25,7 porcento dos laboratórios relataram resultados incorretos, sendo importante ressaltar que o aprimoramento da qualidade analítica em valores próximos a esta concentraçäo é necessário para o diagnóstico e monitoramento dos pacientes com diabetes. A amostra contendo a maior concentraçäo de glicose (1000 mg/dL) foi incorretamente reportada por 55,9 porcento dos participantes e os resultados mostraram uma forte tendência para resultados abaixo da concentraçäo real. Apenas 38,8 porcento dos laboratórios avaliados neste estudo atingiram simultaneamente resultados dentro dos limites de erro estabelecido nas três amostras analisadas


Subject(s)
Humans , Blood Glucose , Glucose Dehydrogenases , Glucose Oxidase , Hexokinase , Quality Control , Benzoic Acid/chemistry , Glycerol , Clinical Laboratory Techniques/methods
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